人肝星形細(xì)胞的成功原代培養(yǎng)，是研究肝纖維化機(jī)制與藥物篩選的核心技術(shù)。這份“生存指南”將助您闖過從組織到功能細(xì)胞的重重關(guān)卡。

　　第一關(guān)：溫和消化，高效分離

　　獲取健康、有活性細(xì)胞的基石在于溫和而高效的消化流程。傳統(tǒng)的單酶消化易導(dǎo)致細(xì)胞團(tuán)塊和活性損傷。推薦采用膠原酶IV與DNA酶聯(lián)用的灌注消化法。膠原酶特異性分解肝組織中的膠原網(wǎng)絡(luò)，而DNA酶能有效降解死亡細(xì)胞釋放的DNA，極大減少細(xì)胞團(tuán)粘附，從而顯著提高HSC的得率與純度。

　　第二關(guān)：精準(zhǔn)“捕撈”，提升純度

　　消化后的細(xì)胞懸液是多種細(xì)胞的混合體。利用HSC固有的脂滴特性（富含維生素A）進(jìn)行密度梯度離心（如Nycodenz梯度離心）是關(guān)鍵一步。此方法能像精準(zhǔn)的“漁網(wǎng)”，將密度較低的HSC與其他肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離開，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供高純度的細(xì)胞群體。

　　第三關(guān)：抑制“叛變”，維持靜息表型

　　原代HSC在體外培養(yǎng)中會(huì)自發(fā)“激活”，從富含脂滴的靜息態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋惩⒌募〕衫w維細(xì)胞，這是功能喪失的標(biāo)志。為延緩此過程：

　　培養(yǎng)基選擇：使用專為HSC設(shè)計(jì)的無血清培養(yǎng)基或優(yōu)化配方，避免血清中未知促激活因子。

　　關(guān)鍵添加劑：在培養(yǎng)基中添加全反式維甲酸（ATRA）等物質(zhì)，有助于維持細(xì)胞內(nèi)維生素A儲(chǔ)存和靜息表型。

　　培養(yǎng)基底：在軟質(zhì)基底（如Matrigel）上培養(yǎng)，能通過力學(xué)信號(hào)傳遞，有效抑制細(xì)胞的活化進(jìn)程。

　　結(jié)語

　　掌握這三大關(guān)鍵技術(shù)——溫和消化、精準(zhǔn)純化與表型維穩(wěn)，方能成功培養(yǎng)出狀態(tài)良好、功能可靠的HSC，為揭開肝纖維化逆轉(zhuǎn)的奧秘奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。